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熒光分光光度法在維生素B1含量測定上的應用

日期: 2022-06-08
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摘要: 維生素B1又名硫胺素,在植物性食物中分布極廣,谷類種子表皮中含量更為豐富, 麥麩、酵母、米糠等均是維生素B1的良好來源。檢測其含量也有著許多的方法。其中熒光分光光度法是對熒光物質進行定性和定量的有效方法,它是維生素B1含量測定的一個比較常用的方法。

本文以測定食品中維生素B1(硫胺素)元素含量為例,依據GB/T5009. 84-2003《食品中硫胺素(維生素B1 )的測定》,應用港東F-380型熒光分光光度計對維生素B1含量進行測定。結果證明此方法操作簡便,線性良好是測定維生素B1含量的理想方法。


關鍵詞: 熒光分光光度法 維生素B1硫胺素食品


?原理

硫胺素在堿性鐵氰化鉀溶液中被氧化成噻嘧色素,在紫外線照射下,噻嘧色素發出熒光。在給定的條件下,以及沒有其他熒光物質干擾時,此熒光之強度與噻嘧色素量成正比,即與溶液中硫胺素量成正比。


?實驗條件

儀器及附件:

天津港東 F-380 型熒光分光光度計

熒光石英比色皿


分析條件:

激發波長:365nm

發射波長:435nm


藥品:

正丁醇、無水硫酸鈉、淀粉酶、鹽酸、乙酸鈉、氯化鉀 、氫氧化鈉 、鐵氰化鉀 、乙酸 、硫胺素標準儲備液(0.1mg/mL)等。


其它:

分析天平(0.0001g) 、容量瓶、鹽基交換柱(填充活 性人造沸石) 、三角瓶、移液管、具塞比色管、擦鏡紙、磁力攪拌器、pH計等。


樣品及標準樣品的制備

樣品溶液的制備:

(1)樣品提取

熒光分光光度法在維生素B1含量測定上的應用

(2)提取液凈化

熒光分光光度法在維生素B1含量測定上的應用

(3)凈化液氧化 (避光暗環境)

熒光分光光度法在維生素B1含量測定上的應用


標準溶液的制備:

(1)硫胺素標準儲備液(0.1mg/mL):

精確稱取100mg經氯化鈣干燥24小時的硫胺素,溶于0.01mol/L鹽酸中,稀釋至1000mL。(于冰箱中避光保存)。?

(2)硫胺素標準中間液(10μg/mL):

取10mL硫胺素標準液,用0.01mol/L鹽酸稀釋至100mL于冰箱中避光保存。

(3)硫胺素標準使用液(0.1μg/mL):

將硫胺素標準中間液用水稀釋用水稀釋至100倍,用時現配。


標準曲線待測液

(1)標準溶液

將20mL硫胺素標準使用液(0.1μg/mL)加入交換柱以代替樣品提取液,即得到標準凈化液。(做三份)

(2)標準待測液

進行標準凈化液的氧化過程,得到標準空白溶液A、標準溶液B(各三份,用作平行)。


? 計算公式

熒光分光光度法在維生素B1含量測定上的應用

X——試樣中硫胺素含量,單位為毫克每百克(mg/100g);

U——試樣熒光強度;

Ub——試樣空白熒光強度;

S——標準熒光強度 ;

Sb——標準空白熒光強度;

c——硫胺素標準使用液濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);

V——用于凈化的硫胺素標準使用液體積,單位為毫升(mL);

V1——試樣水解后定容之體積,單位為毫升(mL);

V2——試樣用于凈化的提取液體積,單位為毫升(mL);

m——試樣質量,單位為克(g);

? ——試樣含量由微克每克(μg/g)換算成毫克每百克(mg/100g)的系數


?測定結果

應用港東F-380型熒光分光光度計的“光度測定”模塊,分別讀取待測溶液的熒光強度,根據計算公式得到樣品維生素B1 的含量。


?結論

采用熒光分光光度法測定維生素B1含量,操作簡單,方法準確,是一種理想的方法。

由于維生素B1待測液遇光不穩定, 因此實驗對儀器的功能要求高。港東F-380型熒光分光光度計率先在硬件上采用了激發側擋光快門的設置,從而避免了樣品被強光的直接照射,使整個實驗操作簡便,結果重現性良好。



This information is subject to change without notice.

? Tianjin Gangdong Sci&Tech.Development Co., 2011

Printed in CHINA, September 1, 2011


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